Expandierung und Charakterisierung virusspezifischer humaner zytotoxischer T-Zellen unter dem Einfluss dendritischer Zellen
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Abstract
Virus infections show the most frequent cause for complications with marrow transplants. A long-term purpose consists in controlling this risk by special systems, e.g., with the help of adoptiver cellular immune therapy on the basis of cytotoxic T-cells. Concerning the introduction of an adoptiven cellular immune therapy as well as an optimum use of this system is an investigation of the bases of special meaning. In this work could be shown that with the help of optimally treated DCs specific CTLs can be generated more successfully than with the LCLs used up to now. The introduction of a peptide system in which the BMLF-1-peptids reached primarily memory cells and the Melan-A-peptide naive precursor's cells, demonstrated determining results. Thus more CD8pos t-cells specific for antigen were formed by ripe peptide-loaded DCs than by immature peptide-loaded DCs. Further it was indicated that also with TLR-matured DCs actual and specific CTLs can be produced. Determining insights could be likewise granted in connection with the Zytokin to IL-12 as well as the enrichment by T-cells specific for CD8pos in the Melan-A- and BMLF-1-system. The specific enrichment of the CD8pos T-cells was clearly decreased in the BMLF-1-system with IL-12, in contrast to the Melan-A-system in which IL-12 owned no influence on the enrichment of the specific CD8pos T-cells. The observation delivered an other interesting aspect that by the use of TGF-ß1 the negative influence could be compensated by IL-12 in the BMLF-1-system. In the Melan-A-system a strengthening of the effector function was investigated by the application of IL-12. A comparison of the Phänotypen of the generated CTLs in both peptide-system BMLF-1 and Melan-A pointed to differences. Thus, e.g., the surface marker CD27 was easily degraded in the Melan-A-system in combination with IL-12. Another result was that of the effector factor FasL rose in both peptide-systems in combination with IL-12 and TGF-ß1 clearly. The cytokine IL-18 did not influence the specific CD8pos-T-cell accumulation. It became clear, that IL-18 in combination with IL-12 the secretion of FasL and TNF-α in both peptide-systems can raise.
Abstract
Virusinfektionen stellen die häufigste Ursache für Komplikationen bei Knochenmarktransplantationen dar. Ein langfristiges Ziel besteht darin, dieses Risiko durch spezielle Systeme, z. B. mithilfe adoptiver zellulärer Immuntherapie auf Basis zytotoxischer T-Zellen, zu kontrollieren. Hinsichtlich der Einführung einer adoptiven zellulären Immuntherapie sowie einer optimalen Nutzung dieses Systems ist eine Erforschung der Grundlagen von besonderer Bedeutung. In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass anhand optimal behandelter DCs spezifische CTLs erfolgreicher generiert werden können als mit den bisher verwendeten LCLs. Die Einführung eines Peptidsystems, in dem das BMLF-1-Peptid hauptsächlich Memory-Zellen und das Melan-A-Peptid naive Vorläuferzellen erreichte, demonstrierte entscheidende Ergebnisse. So wurden mehr Antigen-spezifische CD8pos-T-Zellen durch reife Peptid-beladene DCs gebildet als durch unreife Peptid-beladene DCs. Ferner wurde aufgezeigt, dass auch mit TLR-gereiften DCs effektive und spezifische CTLs hervorgebracht werden können. Entscheidende Einblicke konnten ebenfalls im Zusammenhang mit dem Zytokin IL-12 sowie der Anreicherung von CD8pos-spezifischen T-Zellen im Melan-A- und BMLF-1-System gewährt werden. Die spezifische Anreicherung der CD8pos-T-Zellen wurde im BMLF-1-System mit IL-12 deutlich vermindert, im Gegensatz zum Melan-A-System, in welchem IL-12 keinen Einfluss auf die Anreicherung der spezifischen CD8pos-T-Zellen besaß. Einen weiteren interessanten Aspekt lieferte die Beobachtung, dass bei der Verwendung von TGF-ß1 der negative Einfluss von IL-12 im BMLF-1-System kompensiert werden konnte. Im Melan-A-System wurde durch den Einsatz von IL-12 eine Verstärkung der Effektorfunktionen erforscht. Ein Vergleich der Phänotypen der generierten CTLs in den beiden Peptidsystemen BMLF-1 und Melan-A deutete auf Unterschiede hin. So war z. B. der Oberflächenmarker CD27 im Melan-A-System in Kombination mit IL-12 leicht erniedrigt. Ein weiteres Resultat war, dass der Effektorfaktor FasL in beiden Peptidsystemen in Kombination mit IL-12 und TGF-ß1 deutlich anstieg. Das Zytokin IL-18 beeinflusste die spezifische CD8pos-T-Zell-Anreicherung nicht. Es wurde deutlich, dass IL-18 in Kombination mit IL-12 die Sekretion von FasL und TNF-α in beiden Peptidsystemen erhöhen kann.