Herstellung rekombinanter Antikörperfragmente für die Immun-PCR und Aufklärung der Primärstruktur der Maltosephosphorylase aus Lactobacillus brevis
Im Rahmen des EU-Projektes BE 97-428 (ULISA) wurde die nt-Sequenz der VH-/VL-Regionen der mAK gegen humanes H-FABP (IT13B8/E6) und CEA (2-4.4, 3-55.4) aufgeklärt. Funktionelle Fab- und scFv-Fragmente des mAK IT13B8/E6 wurden exprimiert und via ELISA detektiert. Bei Untersuchung des Klons IT13B8 wurd...
| Verfasser: | |
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| Weitere Beteiligte: | |
| FB/Einrichtung: | FB 12: Chemie und Pharmazie |
| Dokumenttypen: | Dissertation/Habilitation |
| Medientypen: | Text |
| Erscheinungsdatum: | 2007 |
| Publikation in MIAMI: | 29.07.2007 |
| Datum der letzten Änderung: | 22.03.2016 |
| Angaben zur Ausgabe: | [Electronic ed.] |
| Schlagwörter: | Fab; scFv; PCR-ELISA; Streptavidin; Fusionsprotein; Maltosephosphorylase; Lactobacillus brevis |
| Fachgebiet (DDC): | 540: Chemie |
| Lizenz: | InC 1.0 |
| Sprache: | Deutsch |
| Format: | PDF-Dokument |
| URN: | urn:nbn:de:hbz:6-58519402707 |
| Permalink: | https://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:hbz:6-58519402707 |
| Onlinezugriff: | diss_srivastav.pdf |
Im Rahmen des EU-Projektes BE 97-428 (ULISA) wurde die nt-Sequenz der VH-/VL-Regionen der mAK gegen humanes H-FABP (IT13B8/E6) und CEA (2-4.4, 3-55.4) aufgeklärt. Funktionelle Fab- und scFv-Fragmente des mAK IT13B8/E6 wurden exprimiert und via ELISA detektiert. Bei Untersuchung des Klons IT13B8 wurde ein nicht-produktives VH-Gen entdeckt. Die Produktion der scFv-Fragmente erfolgte im Vektor pASKscFvIT1 ohne vorangehende SOE-PCR. Funktionelles CSav wurde zur Produktion von scFv-CSav-Fragmenten exprimiert. Zur Detektion der I-PCR-Produkte wurde ein PCR-ELISA-Verfahren optimiert. Der Nachweis von Pi mittels Enzymbiosensor erfolgt über Maltosephosphorylase (mapA) aus Lactobacillus brevis. Die ermittelte nt-Sequenz umfasst ca. 98,5 Prozent des nativen mapA-Gens. MALDI-TOF-Analyse ergab, dass der C-Terminus des mapA weitere 10-12 AS aufweist. Mittels der nt-Sequenz und Röntgenkristallographie wurde die Tertiärstruktur der mapA ermittelt und Hinweise auf den molekularen Katalysemechanismus erhalten.