Die präzise Koordination der Aktivitäten von Rac1, Cdc42 und RhoA sowie ihre gegenseitige Beeinflussung werden als wichtige regulatorische Mechanismen für die Reorganisation des Aktin-Zytoskeletts betrachtet. Dabei verhalten sich Rac1 und Cdc42 oft kooperativ, während zwischen RhoA und Rac1 bzw. Cdc42 meist ein Antagonismus beobachtet wird. Die genaue Topologie von Rho-GTPase Netzwerken in unterschiedlichen zellulären Prozessen ist noch nicht entschlüsselt. Jedoch wurden kürzlich subzelluläre Rho Aktivitätsoszillationen beschrieben, welche lokale Oszillationen von Aktomyosin-Kontraktionen erzeugen. In dieser Arbeit wurden die räumliche und zeitliche Regulation dieser Rho Aktivitätsoszillationen sowie die gegenseitige Kontrolle der drei Rho-GTPase Aktivitäten systematisch untersucht. Die Expression von aktiven Rho-Mutanten induzierte eine Suppression der Rho Aktivitätsoszillationen, was für eine zentrale Rolle von Rho in dem regulatorischen Netzwerk spricht. Die Aktivierung des Rho spezifischen GEFs GEF-H1 bewirkte eine Verstärkung der Aktivitätsoszillationen, und ihre wellenartige Ausbreitung. Im Gegenzug führte die Depletion dieses GEFs zur Inhibition der Oszillationen. Die Wellenausbreitung deutet darauf hin, dass GEF-H1 als Teil eines Aktivator-Inhibitor Netzwerks durch ein positives Feedback die Aktivität von Rho stimuliert. Übereinstimmend damit korrelierte die Lokalisationsdynamik von GEF-H1 mit den Rho Aktivitätsoszillationen. Basierend auf der Überexpression einer aktiven Mutante sowie anhand von Kreuzkorrelationsanalysen der Aktivitätsmuster konnte gezeigt werden, dass der RhoGEF LARG das positive Feedback von Rho mit einem alternativen Mechanismus vermitteln kann. Ect2 scheint hingegen keine regulatorische Funktion in diesem Netzwerk zu haben. Als eine zusätzliche Ebene der Aktivitätskontrolle wurde im Folgenden die gegenseitige Regulation der Rho-GTPasen Rac1, Cdc42 und RhoA charakterisiert. Hierzu wurden, mittels chemisch induzierter Dimerisierung und Optogenetik, einzelne Rho-GTPasen akut aktiviert und die Antwort der anderen Rho-GTPasen mit fluoreszenzbasierten Aktivitätssensoren gemessen. Wider Erwarten konnte kein Antagonismus zwischen Rho und Rac1 bzw. Cdc42 detektiert werden. Stattdessen erhöhte die Stimulation von Rac1 die Aktivität von Rho signifikant. Diese positive Interaktion zwischen Rac1 und Rho könnte somit die Basis der bereits beobachteten kooperativen Kontrolle dynamischer Zellstrukturen darstellen.