Tetracyclin-regulierte Transgenexpression durch Herpesvirus-saimiri-Vektoren in primären humanen Fibroblasten
Herpesvirus saimiri hat als episomaler, nicht integrierender Vektor interessante Eigenschaften für den Gentransfer in viele unterschiedliche Zelltypen von Säugern und Menschen. Durch Red-vermittelte homologe Rekombination in Bakterien wurden Doxycyclin-regulierbare Transgenkassetten in das virale Genom in bakteriellen artifiziellen Chromosomen inseriert und rekombinante Virusvektoren nach Transfektion in permissive Nierenzellen rekonstituiert. Nach Transduktion primärer menschlicher Fibroblasten wurde die Expression des Zielgens für verstärkt grün fluoreszierendes Protein (eGFP) unter Doxycyclin innerhalb weniger Stunden angeschaltet und nach der Entfernung des Induktors wieder abgeschaltet. Insgesamt konnte diese Arbeit zeigen, dass Vektoren auf der Basis von Herpesvirus saimiri die effiziente Transduktion primärer menschlicher Fibroblasten und die Doxycyclin-abhängige Transgenexpression erlauben, aber hinsichtlich der langfristigen Transgenexpression der epigenetischen Inaktivierung unterliegen.
As an episomal, non-integrating vector, Herpesvirus saimiri has interesting properties for the gene transfer into many different cell types of mammals and humans. By Red-mediated homologous recombination in bacteria, doxycycline-regulated transgene cassettes were inserted into the viral genome in bacterial artificial chromosomes and recombinant virus vectors were reconstituted after transfection into permissive kidney cells. After the transduction of primary human fibroblasts, the expression of the target gene eGFP was switched on by doxycycline within a few hours and switched off again after the removal of the inducer. In summary, this work showed that herpesvirus saimiri-based vectors enable the efficient transduction of primary human fibroblasts and the doxycycline-dependent transgene expression, but are subject to epigenetic inactivation with respect of long-term transgene expression.
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