Konstruktion und Charakterisierung von Lebendvakzine-Kandidaten auf der Basis von siaD-Deletionsmutanten von Neisseria meningitidis Serogruppe B

Construction and characterisation of siaD-deleted mutants of Neisseria meningitidis serogroup B as a meningococcal vaccine

Please always quote using this URN: urn:nbn:de:bvb:20-opus-13738
  • In der vorliegenden Dissertation wurde für die Entwicklung eines Lebendimpfstoffs zum Schutz vor Infektionen durch Neisseria meningitidis Serogruppe B zunächst ein geeigneter Impfstamm aus mehreren Neisserienstämmen der Serogruppe B, ST-32 Komplex, ausgewählt. In diesem sollte anschließend die Sicherheit für den Impfstoff-Empfänger durch die unabhängige Deletion sowohl eines Virulenzgens als auch eines Gens, das die homologe Rekombination der Neisserien bedingt, garantiert werden. Als Virulenzgen wurde siaD deletiert, das für ein essentiellesIn der vorliegenden Dissertation wurde für die Entwicklung eines Lebendimpfstoffs zum Schutz vor Infektionen durch Neisseria meningitidis Serogruppe B zunächst ein geeigneter Impfstamm aus mehreren Neisserienstämmen der Serogruppe B, ST-32 Komplex, ausgewählt. In diesem sollte anschließend die Sicherheit für den Impfstoff-Empfänger durch die unabhängige Deletion sowohl eines Virulenzgens als auch eines Gens, das die homologe Rekombination der Neisserien bedingt, garantiert werden. Als Virulenzgen wurde siaD deletiert, das für ein essentielles Enzym der Kapselbiosynthese kodiert (Edwards et al., 1994). Dabei wurde eine neue Transformationsmethode eingesetzt (modifiziert nach Gunn und Stein; Gunn und Stein, 1996). Die kapsellose siaD-Deletionsmutante wurde dann genotypisch und phänotypisch anhand verschiedener Adhärenz- und Invasionsassays an humanen Epithel-, Endothel- und Dendritischen Zellen geprüft. Dabei fanden sich Unterschiede im Adhärenz und Invasionsverhalten im Vergleich zu einer anderen siaD-Mutante des gleichen Wildtyps. Diese Unterschiede wurden durch eine im Westernblot nachgewiesene, bei beiden siaD-Mutanten unterschiedliche Opa-Expression begründet, da das Opa-Protein als Protein der äußeren Bakterienmembran Oberflächenproteine von humanen Epithel- und Endothelzellen bindet und so zur Adhärenz an die Zielzellen führt (Virji et al., 1993, 1995). Weiterhin sollte in der siaD-Deletionsmutante das für die homologe Rekombination essentielle recA-Gen deletiert werden (Koomey und Falkow, 1987; Miller und Kokjohn, 1990). Der Nachweis einer recA-Deletion gelang trotz mehrfacher Ansätze mit der neuen Transformationsmethode nicht, da die Deletionsrate von recA wahrscheinlich unter der Sensitivität der hier verwendeten Analysemethoden lag.show moreshow less
  • The selection of a possible live-vaccine candidate for Neisseria meningitidis serogroup B and the attenuation of this wildtype by deletion of a virulence gene and a gene for homologous recombination are being described in this thesis. Firstly several wildtypes of Neisseria meningitidis serogroup B are being screened for their ability to proliferate and adhere to human epithelial cells and a wildtype of the ST-32 complex is being selected as the most fitting live-vaccine candidate. In the next step the virulence gene siaD, encoding theThe selection of a possible live-vaccine candidate for Neisseria meningitidis serogroup B and the attenuation of this wildtype by deletion of a virulence gene and a gene for homologous recombination are being described in this thesis. Firstly several wildtypes of Neisseria meningitidis serogroup B are being screened for their ability to proliferate and adhere to human epithelial cells and a wildtype of the ST-32 complex is being selected as the most fitting live-vaccine candidate. In the next step the virulence gene siaD, encoding the polysialyltransferase (Edwards et al., 1994), is being deleted in this wildtype by a new transformation method (modified after Gunn und Stein; Gunn und Stein, 1996), followed by genotypical and phenotypical screening of the unencapsulated, siaD-deleted mutant. The unencapsulated mutant showed unexpected differences in its ability to interact with human epithelial, endothelial and dendritic cells compared to another unencapsulated, siaD-deleted mutant of the same wildtype. A westernblot proved this to be caused by a different opa-expression, a protein of the outer membrane, which is important for the interaction of Neisseria meningitidis with human cells (Virji et al., 1993, 1995). After deleting siaD several attempts are being done to delete the recA gene, which is important for homologous recombination (Koomey und Falkow, 1987; Miller und Kokjohn, 1990), with the same transformation method, but a deletion of recA is not being proved. This may be caused by the sensitivity of the used analysing methods, which may be too low for the transformation rate of this gene.show moreshow less

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Metadaten
Author: Thomas Leimbach
URN:urn:nbn:de:bvb:20-opus-13738
Document Type:Doctoral Thesis
Granting Institution:Universität Würzburg, Medizinische Fakultät
Faculties:Medizinische Fakultät / Institut für Hygiene und Mikrobiologie
Date of final exam:2005/06/13
Language:German
Year of Completion:2005
Dewey Decimal Classification:6 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften / 61 Medizin und Gesundheit / 610 Medizin und Gesundheit
Tag:Kapsel; lebendvakzine; meningokokken-impfstoff; neisseria meningitidis; siaD
capsule; live-vaccine; meningococcal vaccine; neisseria meningitidis; siaD
Release Date:2005/07/13
Advisor:Prof. Dr. med. Matthias Frosch