gms | German Medical Science

Hintergrund: Die Rho-GTPase-Familie ist ein wichtiger Regulator der Zellproliferation, Migration, Adhäsion und Genexpression. Das am besten charakterisierte Mitglied der Rho-GTPasen ist das RhoA-Protein, dessen Gen sich auf dem Chromosom-3 befindet. Jedoch wurde die RhoC Isoform, die in der Abwesenheit von RhoA hochreguliert werden kann, kürzlich in erhöhten Konzentrationen in mehreren invasiven Formen von verschiedenen Tumoren nachgewiesen. In dieser Studie untersuchten wir die Expression der RhoA und RhoC-Proteine sowie die Proliferationsrate und Rho-Kinase-Aktivität in den uvealen Melanom(UM)-Zellen mit Monosomie-3 im Vergleich zu den Zellen mit Disomie-3.

Methoden: UM-Zellen wurden aus dem primären Tumor einer in unserer Klinik behandelten Patientin (48 Jahre) isoliert, die Lebermetastasen innerhalb von 2 Jahren nach der Enukleation entwickelte. Kultivierte Zellen (Passagen 1-3) wurden durch Dispase dissoziiert, auf 8-Well-Kammerobjektträger ausgesät und in Kulturmedium (RPMI-1640 ergänzt mit 1% fötalem Rinderserum, 2 mM L-Glutamin und Penicillin / Streptomycin) mit oder ohne Insulin-like growth factor-1 (IGF-1, 50 ng/ml) und dem Rho-Kinase-Inhibitor H-1152 (5 µM) für 3 Tage inkubiert. Ein Immuno-FISH-Assay wurde für den gleichzeitigen Nachweis der Proteine und der Kopienzahl des Chromosoms-3 entwickelt.

Ergebnisse: Monosomie-3 wurde in ca. 55% der kultivierten UM-Zellen nachgewiesen. Das RhoA-Protein wurde um 30% niedriger exprimiert während die Expression des RhoC-Proteins um 40% erhöht wurde in den Zellen mit Monosomie-3 im Vergleich zu den Zellen mit Disomie-3 (P <0,05). IGF-1 führte zu einer deutlichen Zunahme in der Hochregulierung des Proliferationsmarkers Ki-67 und der Phosphorylierung der Myosinphosphatase-1 in den Zellen mit Monosomie-3, während der Rho-Kinase-Inhibitor diese Ereignisse unterdrückte.

Schlussfolgerungen: Unsere vorläufigen Ergebnisse zeigen die Hochregulation von RhoC in den UM-Zellen mit Monosomie-3, möglicherweise als Ersatz für RhoA. Dies könnte zu einer erhöhten Rho-Kinase-Aktivität und Proliferationsrate in Reaktion auf IGF-1 führen, was an dem höheren Metastasierungspotential von UM-Zellen mit Monosomie-3 liegen könnte.