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Proteinase 3 Stimulation immortaler nasaler Epithelzellen
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Published: | April 17, 2009 |
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Einleitung: Das lokalisierte Stadium der Wegener-Granulomatose (WG) ist durch eine granulierend- nekrotisierende Entzündung der nasalen Schleimhaut gekennzeichnet und geht der systemischen Manifestation der Kleingefäßvaskulitis in der Regel voraus.
Es ist bekannt, dass Proteinase 3 (PR-3) eine ätiopathologische Bedeutung für die WG hat. PR-3 aktiviert in oralen Epithelzellen PAR-2-Rezeptor-abhängig die Sekretion des proinflammatorischen Zytokins IL-8. Die IL-8-Sekretion immortaler nasaler Epithelzellen auf Stimulation mit PR-3 wurde bisher nicht untersucht.
Methode: Mittels immunzytochemischer Verfahren wurde die Expression von PAR-2 auf immortalen nasalen Zellen (RPMI-2650) untersucht. Präkonfluente Monolayer dieser Zelllinie wurden in jeweils einem Well für 24h und 48h mit PR-3 stimuliert (10µg/ml) und die IL-8-Sekretion mittels ELISA quantifiziert. Als Negativkontrolle wurden pro Messzeitpunkt zwei unstimulierte Wells mitgeführt. Mittels Trypanblau-Exklusionstest wurde die Vitalität der Zellen dokumentiert.
Ergebnisse: Immunzytochemisch konnte die Expression von PAR-2 auf RPMI-2650 nachgewiesen werden. Sowohl nach 24h (2,19 pg/ml) als auch 48h (2,74 pg/ml) konnte gegenüber den Negativkontrollen (3,4 pg/ml und 0,82 pg/ml) kein eindeutiger Stimulationseffekt gezeigt werden.
Diskussion: Zellen der immortalen Linie RPMI-2650 exprimieren konstitutiv PAR-2. Mittels PR-3 kann bisher keine Stimulation zur Sekretion des proinflammatorischen Zytokins IL-8 erfolgen. Weitere Untersuchungen des Stoffwechselweges (PAR-2, NF-kappa B) werden ebenso durchgeführt wie Untersuchungen zu PR-3 hemmenden Effekten im beschriebenen serumhaltigen Versuchsansatz.