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Generation of Recombinant Primary Human B Lymphocytes Using Non-Viral Vectors

DOI zum Zitieren der Version auf EPub Bayreuth: https://doi.org/10.15495/EPub_UBT_00006533
URN zum Zitieren der Version auf EPub Bayreuth: urn:nbn:de:bvb:703-epub-6533-2

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Keim, Daniel ; Gollner, Katrin ; Gollner, Ulrich ; Jérôme, Valérie ; Freitag, Ruth:
Generation of Recombinant Primary Human B Lymphocytes Using Non-Viral Vectors.
In: International Journal of Molecular Sciences. Bd. 22 (2021) Heft 15 . - No. 8239.
ISSN 1422-0067
DOI der Verlagsversion: https://doi.org/10.3390/ijms22158239

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Format: PDF
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Projektfinanzierung: Deutsche Forschungsgemeinschaft

Abstract

Although the development of gene delivery systems based on non-viral vectors is advancing, it remains a challenge to deliver plasmid DNA into human blood cells. The current “gold standard”, namely linear polyethyleneimine (l-PEI 25 kDa), in particular, is unable to produce transgene expression levels >5% in primary human B lymphocytes. Here, it is demonstrated that a well-defined 24-armed poly(2-dimethylamino) ethyl methacrylate (PDMAEMA, 755 kDa) nano-star is able to reproducibly elicit high transgene expression (40%) at sufficient residual viability (69%) in primary human B cells derived from tonsillar tissue. Moreover, our results indicate that the length of the mitogenic stimulation prior to transfection is an important parameter that must be established during the development of the transfection protocol. In our hands, four days of stimulation with rhCD40L post-thawing led to the best transfection results in terms of TE and cell survival. Most importantly, our data argue for an impact of the B cell subsets on the transfection outcomes, underlining that the complexity and heterogeneity of a given B cell population pre- and post-transfection is a critical parameter to consider in the multiparametric approach required for the implementation of the transfection protocol.

Weitere Angaben

Publikationsform: Artikel in einer Zeitschrift
Keywords: non-viral gene delivery; human B lymphocytes; primary cells; poly(2-dimethylamino)
ethyl methacrylate; polycation; nano-star
Themengebiete aus DDC: 500 Naturwissenschaften und Mathematik > 570 Biowissenschaften; Biologie
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften > 600 Technik
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften > 610 Medizin und Gesundheit
Institutionen der Universität: Fakultäten > Fakultät für Ingenieurwissenschaften > Lehrstuhl Bioprozesstechnik > Lehrstuhl Bioprozesstechnik - Univ.-Prof. Dr. Ruth Freitag
Fakultäten
Fakultäten > Fakultät für Ingenieurwissenschaften
Fakultäten > Fakultät für Ingenieurwissenschaften > Lehrstuhl Bioprozesstechnik
Sprache: Englisch
Titel an der UBT entstanden: Ja
URN: urn:nbn:de:bvb:703-epub-6533-2
Eingestellt am: 22 Jul 2022 04:57
Letzte Änderung: 22 Jul 2022 04:57
URI: https://epub.uni-bayreuth.de/id/eprint/6533

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